An analytical approach to quantify plasmalogens in human milk and infant formula

L’obiettivo del lavoro di tesi è lo sviluppo di un metodo analitico per identificare e quantificare le diverse specie di plasmalogeni presenti nel latte umano e nelle formule infantili. Con l’analisi dei fosfolipidi è stato riscontrato un contenuto di fosfatidiletanolamina superiore ai valori attesi, suggerendo la presenza di interferenti, quali i plasmalogeni. I plasmalogeni sono glicerofosfolipidi che, nel caso dei plasmalogeni etanolaminici (PlsEtn), presentano etanolamina in posizione sn-3 e svolgono un ruolo strutturale e funzionale nelle membrane cellulari. Essi sono particolarmente abbondanti nel cervello, dove sono coinvolti in processi quali protezione neuronale e trasmissione sinaptica. Nella prima infanzia, i PlsEtn presenti nella membrana del globulo lipidico del latte contribuiscono al trasporto del DHA, supportando lo sviluppo neurocognitivo. La prima fase è stata l’estrazione dei fosfolipidi totali mediante il metodo Folch, opportunamente ottimizzato per entrambe le matrici al fine di massimizzare il recupero dell’analita e l’intensità del segnale. La separazione e l’identificazione sono state effettuate mediante HPLC-MS/MS utilizzando uno spettrometro di massa Q Exactive Plus, particolarmente adatto all’analisi dei plasmalogeni. L’isolamento selettivo del quadrupolo, la frammentazione HCD e il rilevamento Orbitrap ad alta risoluzione hanno consentito una discriminazione affidabile delle specie e l’identificazione del legame vinile-etere. Il metodo ha permesso l’identificazione di diverse specie di plasmalogeni etanolaminici nel latte umano e nel latte artificiale. La validazione del metodo ha mostrato buone prestazioni in termini di sensibilità, linearità e precisione intragiornaliera; tuttavia, l’elevata variabilità intergiornaliera indica la necessità di testare uno standard interno isotopicamente marcato per migliorare la robustezza del metodo.