Purificazione e caratterizzazione di vescicole extracellulari da succo di limone

Le vescicole extracellulari (Extracellular vescicles o EVs) sono delle piccole particelle biologiche che vengono secrete dalle cellule di tutti gli organismi viventi. Queste vescicole sono presenti in diverse popolazioni differenti e tutte sono costituite da un doppio strato fosfolipidico, esattamente come le cellule da cui hanno origine. Sappiamo che sono in grado di trasportare diverse molecole biologiche, tra cui proteine, lipidi e acidi nucleici e sono inoltre coinvolte nella comunicazione intercellulare. In questo progetto di tesi, sono state isolate e caratterizzate le vescicole extracellulari provenienti da succo di limone. Infatti, anche le cellule vegetali producono vescicole extracellulari (Plant-derived extracellular vescicles o PDEVs), e hanno morfologia e composizione molto simili a quelle degli organismi animali. L’interesse verso le vescicole extracellulari prodotte dalle piante è dovuto sia alla loro funzione biologica, specifica della cellula vegetale che le produce, sia alla loro possibile applicazione come “nanocarriers” di farmaci. La scelta di utilizzare i limoni come fonte biologica di vescicole extracellulari si basa sul fatto che, oltre al fatto di essere economici e facilmente reperibili nell’arco dell’intero anno, possiedono proprietà antiossidanti, antimicrobiche, antinfiammatorie ed antitumorali. L’attività sperimentale svolta nell’ambito di questo lavoro di tesi si basa sull’ottimizzazione dei processi di separazione a membrana per la purificazione di vescicole extracellulari. Nello specifico sono stati sviluppati dei protocolli che prevedono una prima chiarificazione del succo da trattare mediante centrifugazione, microfiltrazione e successivamente una fase di purificazione mediante l’utilizzo della diafiltrazione con membrane da ultrafiltrazione. Per la microfiltrazione e diafiltrazione sono stati utilizzati un sistema batch tramite una cella dea-dend Amicon® e moduli a fibre cave di Medica SpA per processi in continuo.