Analisi e sviluppo di una procedura di post-processing per immagini acquisite da telecamere in toni di grigio

Ai giorni nostri, la Microscopia è diventata una disciplina fortemente legata all’acquisizione di immagini digitali, in questo scenario, disporre di una telecamera in grado di acquisire immagini a colori, ad esempio una telecamera RGB, diventa fondamentale per varie discipline della Microscopia. Tuttavia, nel campo della Microscopia a Fluorescenza, dove si perde la correlazione cromaticità-tessuto e dove si contano fotoni emessi da sonde fluorescenti legate a particolari compartimenti sub-cellulari di interesse, sono tipicamente utilizzate telecamere in toni di grigio, molto più sensibili di quelle a colori. Non sempre nei laboratori è possibile avere a disposizione tutte le attrezzature necessarie, c’è quindi bisogno di poter sfruttare, dove possibile, tutte le potenzialità delle attrezzature già disponibili per l’acquisizione d’immagine in toni di grigio, poiché, utilizzando in maniera intelligente dei filtri di plastica, tipicamente presenti microscopio per selezionare fotoni d'interesse a seconda della sonda fluorescente utilizzata, si potrebbero ricostruire immagini a colori partendo da una serie di tre immagini acquisite in scala di grigio, utilizzando in sequenza un filtro per il range di lunghezze d’onda del Rosso (R), del Verde (G) e del Blu (B). Ciò permetterebbe l’opportunità di utilizzare immagini a colori e sfruttare l’attrezzatura già presente all’interno di un laboratorio, non appositamente sviluppata, rendendo superfluo l’uso o acquisto di strumentazione dedicata all’acquisizione di immagini a colori. In questo lavoro di Tesi, abbiamo verificato la possibilità di acquisizione di immagini “fake-RGB” utilizzando un microscopio confocale dotato di telecamera in toni di grigio. Abbiamo quindi definito una metrica quantitativa, il Delta E normalizzato, per poter confrontare immagini “fake-RGB” con immagini a colori, realmente acquisite con una telecamera a colori, ed abbiamo discusso limiti e possibilità fornite dalla strumentazione.